广州管圆线 -

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广州管圆线虫特异性rRNA基因的PCR扩增
2扩增广州管圆线虫DNA，具体结果(图1)。PCR产物大小约为300bp．与设计大小一致。图l广州管圆线虫成虫rA大亚基基因部分序列PCR扩增结果Fig．1PCRamplificationoflargesubunitribosomalRNAgeneofAngiostrongyluscantonensisM：DNAMarker(DL200o)；1：ProductofPCR．2．2PCR方法的敏感性和特异性测得PCR能扩增出相应DNA条带的最低模板浓度约为50pg／la,1，用本实验合成的引物分别扩增上述三种其他寄生虫的DNA．结果均未有阳性扩增条带出现。·415·2．CR扩增产物的测序TGA-IBC【'GGCG兀TI℃GTCCGTGGCCGGCAAATGTGCGTGTATAGCGCACTGACGCTGGACTAGTGATArGACCACCrrGTGGACAT1T】1ACAGGTGTG．JBC丌'I’GCC兀’CGGGC兀IACTAI℃CTGATCGACCATCAAAACGGTCGAACTGGAACTGGIlACGGACrCGGGGAArCCGACTGTCTAATI"AAAACAGAGGAGACAGATGGTCC兀IGCGRACGITTACT(CTCTGA硼rlGCCCAGIIGCTCrGAArGrrAAArCGTAGTAA兀IcGAGTAAGCGCGGCTAAACGGCG上述DNA大小为297bp。结果与被扩增的广州管圆线虫目的基因序列完全一致(加下划线部分为引物或与引物互补的序列)。3讨论近年来广州管圆线虫病发病有上升趋势。且偶有爆发流行的报道r3l，引起人们越来越多的重视。由于该病目前使用的病原学和免疫学检查方法各自存在缺陷，导致诊断效果不理想，因此，有必要开发新的更有效的诊断手段。PCR试验是公认的敏感和特异的检测方法。对感染性疾病具有较好的诊断价值。且有许多成功的报道。要将该方法引入人体广州管圆线虫病的诊断．首先必须获得好的检测靶标，以使PCR诊断具有良好的敏感性和特异性。rRNA是细胞中含量最多的一种RNA．其编码基因通常是多拷贝基因．结构保守，具有较高的用于PCR诊断的价值。本实验结果亦显示．用该虫体rRNA大亚基基因部分序列设计的引物具有较好的敏感性和特异性．其中，以该引物进行的PCR反应的敏感性是文献报道方法的500倍。上述PCR方法对广州管圆线虫成虫rRNA大亚基基因部分序列扩增的成功，加之实验方法具有较好的敏感性和特异性。这就为用该方法扩增广州管圆线虫感染宿主的标本或用于人体广州管圆线虫病的诊断奠定了良好的基础。[
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